總脂肪酸甲酯與次麻油酸甲酯含量測定法 Facebook Plurk Twitter

        測定轉酯化產物或油脂衍生物(Fat and oil derivatives)之脂肪酸甲酯(Fatty acid methyl ester;FAME)、游離甘油(Free glycerin)、單酸甘油酯(Monoglycerides)、雙酸甘油酯(Diglycerides)、三酸甘油酯(Triglycerides)與甲醇含量之方法,除常見之薄層層析法(Thin film chromatography;TLC)、氣相層析法(Gas chromatography)、高效液相層析技術(High Performance Liquid Chromatography;HPLC)、凝膠滲透層析法(Gel permeation chromatography ;GPC)外,還有1H核磁共振法(1H Nuclear magnetic resonance;1H NMR)與近紅外光譜法(Near infrared spectroscopy;NIR)等。其中,以層析法為基準之測定方法,雖有待測樣品製備程序複雜與時間冗長等問題,但因發展歷史較久,相關之設備較為普及,是各國制定國家標準時最為常採用之測定方法。

        層析法為一種將混合各種成分之試料樣品,透過層析作用後予以分開,再利用適當之方法予以測定,以求出試料樣品成分之方法。用於層析之儀器系統主要是由試料樣品注射器(Injector)、分離柱或管柱(Column)、偵測器(Detector)與記錄器(Recorder)等四個部分所組成。而分離試料樣品之部分,則由固定相(Stationary phase)與流動相(Mobile phase)所構成,二者各有不同之極性,加上試料樣品因自身極性強弱差異,與固定相及流動相之親和力自然不相同,與固定相親和力較大者,易留滯在原地,與流動相親和力較大者,易隨流動相流動,因而達成分離之目的。

        層析法所使用之固定相可以是填充凝膠或離子交換樹脂之管柱、濾紙、塗佈吸收劑之薄層,流動相可以是氣體或液體;其中,流動相是氣體者,稱為氣相層析(Gas chromatography;GC),流動相是液體者,稱為液相層析(Liquid chromatography;LC),流動相是超臨界流體者,稱為超臨界流層析(Supercritical fluid chromatography;SFC)。

         臺灣國家標準中關於油脂衍生物-脂肪酸甲酯之總脂肪酸甲酯與次麻油酸甲酯(Linolenic acid methyl esters)之測定法(CNS15051),係利用氣相層析法,並以十七烷酸甲酯(Heptadecanoic acid methyl ester)作為內標物,以測定總脂肪酸甲酯與次麻油酸甲酯含量之方法。在氣相層析部分,使用之氣相層析儀配備分流式注入口與火焰離子化偵測器(Flame ionization detector;FID),注入埠與FID須配備獨立之溫控裝置與氣體流量調節器,使用之載氣為氦氣或氫氣,壓力30~100 kPa,分流氣體流速為20~100 ml/min,溫度可達250℃以上,以適合毛細管柱層析,搭配之管柱為惰性材料(如玻璃或熔融矽膠)所製作之毛細管柱,內徑0.2~0.8 mm,長度25~30 m,固定相則建議使用極性化合物,如聚乙二醇(Polyethylene glycol 20000;PEG)、聚酯(Butanediol polysuccinate)或中等極性之聚矽氧烷等,以儘量能分離脂肪酸甲酯之成分,並避免使用高極性之聚矽氧烷管柱,否則可能會有C18,3次麻油酸甲酯與C20之脂肪酸甲酯不易分離鑑別之情形。在待測樣品之製備部分,先以50 ml之量瓶精秤約500 mg之十七烷酸甲酯,再添加庚烷(Heptane)至量瓶刻度,均勻混合,依精秤量計算溶液之十七烷酸甲酯濃度CE1,然後於10 ml之螺旋蓋玻璃瓶(瓶蓋內襯聚四氟乙烯PTFE膜面之墊片)精秤250 mg之樣品,再以定量吸管加入5 ml(VE1)之十七烷酸甲酯,蓋上瓶蓋均勻混合,再以手動或自動液體注射器將0.1~1.0μl之樣品注射到分流注入口,進行層析分析,所使用之層析條件,如樣品注入量、管柱溫度、載氣壓力或流量、分流比等必須要能清楚區分出C24,0與C24,1之脂肪酸甲酯成分波峰。層析後,由獲得之層析圖與波峰積分報告,可以計算總脂肪酸甲酯之含量C(m/m):

        總脂肪酸甲酯含量

  • ΣA:C14至C24,1脂肪酸甲酯成分峰之間所有成分峰隻積分總面積
  • AEI:內標物十七烷酸甲酯之波峰面積
  • CEI:內標物十七烷酸甲酯之濃度(mg/ml)
  • VEI:內標物十七烷酸甲酯之體積(ml)
  • m:製備待測樣品時所精秤之樣品質量(mg)

        次麻油酸甲酯之含量L(m/m):

        次麻油酸甲酯含量

  • ΣA:C14至C24,1脂肪酸甲酯成分峰之間所有成分峰隻積分總面積
  • AEI:內標物十七烷酸甲酯之波峰面積
  • AL:次麻油酸甲酯之波峰面積

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